Отримання трансгенних рослин капусти броколі, що містять ген лейкоцитарного інтерферону альфа – 2b

Анотація

Інтерферон альфа-2b – це інтерферон лейкоцитарного типу, який використовують при лікуванні вірусних та онкологічних захворювань. Сучасні методи генетичної інженерії дозволяють отримувати для потреб медицини рекомбінантний інтерферон, що синтезується бактеріальними штамами E.coli. Але також рекомбінантний інтерферон можна синтезувати і в рослинах. Використання рослин для синтезу рекомбінантних білків є безпечнішим та дешевшим, у порівнянні з бактеріями, крім того, рослини здатні забезпечити правильну посттрансляційну модифікацію білка. Метою нашої роботи було отримання трансгенних рослин капусти броколі, в яких проходить синтез лейкоцитарного інтерферону людини альфа-2b. Ми вибрали капусту броколі об´єктом дослідження, тому що у молодих пагонах цієї рослини міститься речовина сульфорафан, що відомий своєю протипухлинною активністю. Поєднання сульфорафану та інтерферону може покращити протипухлинний ефект таких трансгенних рослин. Для отримання трансгенних рослин проводили Agrobacterium-опосередковану трансформацію рослин капусти броколі генетичним вектором, що містить гени людського інтерферону альфа-2b та фосфінотрицинацетилтрансферази. Як експланти ми використовували гіпокотилі 10-денних асептичних проростків капусти броколі сорту Романеско, оскільки вони продемонстрували найвищу здатність до регенерації. Регенерацію експлантів проводили на середовищі Мурасіге-Скуга, що містило бензиламинопурин 3 мг/л, нафтилоцтову кислоту - 0,05 мг/л, а також 5 мг/л фосфінотрицину для селекції трансгенних рослин. Активна регенерація рослин брокколі спостерігалася на трансформованих експлантатах через чотири тижні після трансформації. У цьому дослідженні були отримані стійкі до фосфінотрицину рослини броколі сорту Романеско, які потенційно містять людський ген інтерферону альфа-2b.